《龟兔再跑》对经典童话故事《龟兔赛跑》进行了大胆的构思设想，最大改变是将原来寓言故事中一龟一兔的设定，变成了天生“冤家”的一群乌龟和一群兔子的故事，使得剧情更加欢乐热闹。另外剧情还融入了不少港式无厘头笑料，像龟兔赛跑过程中的种种意外状况俨然星爷附体，笑倒一片。
影片故事从农夫将四只兔子带到农庄开始，刚开始这四只兔子跟四只乌龟相敬如宾地相处，兔子却无意中发现主人对乌龟的偏爱，引爆了它们的忌妒，兔子对于目前农庄的待遇不公，令自己今天无法在主人及众动物面前抬起头，归咎于当年祖宗的耻辱落败。所以兔子们提出了和乌龟再次比赛的要求！曾经“流洋”归来而心高气傲的“海龟”冲口而出接受挑战，这场千年后的“终极名誉之战”一触即发，在这场世纪大战中，竟然背后还隐藏着一个惊天大阴谋。
除了剧情，影片各角色形象及性格都萌态十足，“萌萌哒”让人印象深刻。比如只往左边/右边看事物的左兔兔/右兔兔、说话总是重叠字的说兔兔、傻傻分不清的晚龟与夜龟、字句里总是夹杂着英文的海龟、称老鼠为“鼠哥”的胖猫等等。这些萌角色配合超搞笑的剧情，不少小朋友也是边看边笑直呼“太好玩了”。值得一提的是，《龟兔再跑》的配音阵容相当不俗，曾为《喜羊羊与灰太狼》系列、《宝贝女儿好妈妈》系列、《猪猪侠》系列、《机器猫》、《大力水手》等众多动画片配音的张琳、李团、祖晴等倾情“献声”。
